p.27
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la deuxième étape dans le principe de la technologie de l'ADN recombinant?
Amplification du fragment d'ADN.
p.3
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Qu'est-ce que le génie génétique ou la technologie de l'ADN recombinant?
Ensemble des techniques de construction d’un ADN recombinant et ses utilisations.
p.1
Définitions du clonage
Comment se fait l'amplification d'un fragment d'ADN dans le clonage?
Par des micro-organismes après son insertion dans un vecteur.
p.7
ADN recombinant et vecteurs
Quels sont les composants de l'ADN?
L'ADN est composé de deux brins avec les bases A, T, G, et C.
p.10
Amplification de l'ADN par PCR
Qu'est-ce que la PCR (Polymerase Chain Reaction) ?
La PCR est une réaction de polymérisation en chaîne à partir d'amorces spécifiques de l'ADN d'intérêt, grâce à l'action d'une enzyme, l'ADN polymérase, dans un milieu contenant des nucléotides.
p.10
Amplification de l'ADN par PCR
Quels sont les composants nécessaires pour une réaction de PCR ?
Des amorces spécifiques de l'ADN d'intérêt, l'ADN polymérase, et un milieu contenant des nucléotides.
p.2
ADN recombinant et vecteurs
D'où provient l'ADN recombinant?
D'une combinaison entre l'ADN d'un organisme donneur et celui d'un vecteur (qui peut être d'une espèce totalement différente).
p.1
Définitions du clonage
Qu'est-ce que le clonage reproductif?
Une multiplication à l'identique à l'échelle de l'organisme entier, conservant parfaitement l'information génétique.
p.8
Définitions du clonage
Comment l'ADN génomique est-il extrait?
À partir d'une culture cellulaire.
p.6
Définitions du clonage
Quel est le rôle de l'organisme donneur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Fournir le fragment d'ADN d'intérêt.
p.12
Amplification de l'ADN par PCR
Quel est l'objectif de l'amplification du fragment d'ADN d'intérêt?
Multiplier le fragment d'ADN d'intérêt.
p.9
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.14
Amplification de l'ADN par PCR
Quel est le rôle de l'ADN polymérase dans l'élongation?
Synthétiser le brin complémentaire à partir des amorces.
p.22
Définitions du clonage
Comment un plasmide peut-il être transféré?
Il peut être transféré d'une cellule à une autre.
p.18
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la séquence de l'amorce utilisée dans le produit PCR formé à partir du brin 3?
5'G T C G G A A T C C A T G C G T A C G 3'
p.30
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
De quelle bactérie provient l'enzyme EcoRI?
De la bactérie Escherichia coli.
p.32
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Que se passe-t-il après la coupure par l'enzyme EcoRI?
La coupure par EcoRI crée des extrémités cohésives.
p.34
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Que se passe-t-il après la digestion du fragment d'ADN d'intérêt?
L'ADN est inséré dans le vecteur.
p.29
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Comment l'ADN bactérien est-il protégé de la coupure par les enzymes de restriction?
Par des modifications du type méthylation.
p.1
Définitions du clonage
Qu'est-ce que le clonage cellulaire?
Une multiplication à l'identique à l'échelle cellulaire, conservant parfaitement l'information génétique.
p.8
Définitions du clonage
Quels sont les deux types d'ADN que l'organisme donneur peut fournir?
ADN génomique et ADN complémentaire (ADNc).
p.4
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur en biologie moléculaire?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.10
Amplification de l'ADN par PCR
Quel type de fragment d'ADN peut être amplifié par PCR ?
Un fragment d'ADN d'intérêt, qu'il soit un gène entier ou tronqué.
p.4
Principe de la technologie de l'ADN recombinant
Quel est le principe de la technologie de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt, clonage dans un vecteur, et obtention de l'ADN recombinant.
p.7
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quel est le processus de synthèse des protéines chez les eucaryotes?
Chez les eucaryotes, l'ADN est transcrit en ARN, qui est ensuite maturé en ARNm, puis traduit en protéines.
p.16
Amplification de l'ADN par PCR
Pourquoi l'ADN polymérase utilisée dans la PCR ne doit-elle pas être dénaturée à 95°C?
Parce que l'ADN polymérase doit rester active à haute température pour la PCR.
p.19
Amplification de l'ADN par PCR
Comment les produits PCR se multiplient-ils après le troisième cycle?
De façon exponentielle par rapport aux produits non souhaités.
p.25
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un site de clonage multiple dans le plasmide pET-15b?
De nombreux sites de restriction uniques permettant l'insertion de l'ADN après le promoteur.
p.18
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la séquence de l'amorce utilisée dans le produit PCR formé à partir du brin 2?
5'G T C G G A A T C C A T G C G T A C G 3'
p.31
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quel est l'exemple de site de restriction mentionné dans le document?
Le site de restriction de l'enzyme EcoRI.
p.33
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Que permet le site de clonage multiple dans le plasmide pET-15b?
Il permet l'insertion de l'ADN après le promoteur grâce à de nombreux sites de restriction uniques.
p.34
Définitions du clonage
Pourquoi le fragment d'ADN d'intérêt ne peut-il pas être directement utilisé pour le clonage?
Il ne contient pas les bons sites de restriction.
p.43
ADN recombinant et vecteurs
Quelle caractéristique doit avoir le plasmide pour être répliqué dans les bactéries?
Une origine de réplication bactérienne.
p.5
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.5
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la deuxième étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Amplification du fragment d'ADN.
p.12
Amplification de l'ADN par PCR
Que se passe-t-il lors de la dénaturation de l'ADN?
Séparation des brins complémentaires.
p.9
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Que signifie le clonage dans le contexte de l'ADN recombinant?
Clonage du fragment d'intérêt dans le vecteur.
p.16
Amplification de l'ADN par PCR
Quelles sont les trois étapes répétées dans la PCR?
Dénaturation, hybridation, élongation.
p.27
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.21
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un site de clonage multiple?
Un site pour l'insertion du fragment d'ADN correspondant à différents sites uniques de restriction.
p.3
ADN recombinant et vecteurs
D'où provient l'ADN recombinant?
D'une combinaison entre l'ADN d'un organisme donneur et celui d'un vecteur (qui peut être d'une espèce totalement différente).
p.10
Amplification de l'ADN par PCR
Quel est le rôle de l'ADN polymérase dans la PCR ?
L'ADN polymérase catalyse la réaction de polymérisation en chaîne en utilisant des amorces spécifiques de l'ADN d'intérêt.
p.4
Obtention de l'ADN recombinant
Que se passe-t-il après l'extraction du fragment d'ADN d'intérêt?
Le fragment d'intérêt est cloné dans le vecteur.
p.5
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la cinquième étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Amplification de l'ADN recombinant obtenu.
p.13
Amplification de l'ADN par PCR
À quelle température se produit l'hybridation des amorces?
À une température Tm spécifique de l'amorce.
p.20
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.19
Amplification de l'ADN par PCR
Qu'est-ce qui apparaît à la fin du troisième cycle de PCR?
Deux produits PCR attendus apparaissent.
p.26
Transformation des bactéries et sélection
Quel gène de résistance est présent dans le plasmide pET-15b?
Gène de résistance à l'Ampicilline.
p.27
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quelle est la première étape dans le principe de la technologie de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt de l'organisme donneur.
p.21
Transformation des bactéries et sélection
Quelle est l'importance d'un marqueur de sélection dans un vecteur?
Il permet de sélectionner les cellules ayant intégré le vecteur, souvent par un gène de résistance à un antibiotique ou un marqueur de sélection métabolique.
p.30
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quel est l'exemple de site de restriction mentionné dans le document?
Le site de restriction de l'enzyme EcoRI.
p.3
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Que peuvent exprimer les cellules modifiées ayant intégré un ADN recombinant?
Elles peuvent exprimer la protéine recombinante (protéine d’une espèce différente, protéine modifiée comme mutée ou fusionnée à une étiquette).
p.11
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la séquence à amplifier dans ce document?
5' T A T C G T C G G A A T C C A T G C G T A C G 3' et 3' A T A G C A G C C T T A G G T A C G C A T G C 5'
p.12
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la première étape de l'amplification du fragment d'ADN d'intérêt?
La dénaturation de l'ADN.
p.4
Utilisation de l'ADN recombinant
Quelles sont les utilisations de l'ADN recombinant?
Expression et purification des protéines correspondantes, étude du niveau d'expression et des fonctions des protéines.
p.7
ADN recombinant et vecteurs
Quels sont les composants des protéines?
Les protéines sont composées d'acides aminés.
p.16
Amplification de l'ADN par PCR
À partir de quel cycle l'amplification exponentielle du fragment d'intérêt commence-t-elle?
À partir du troisième cycle.
p.22
Définitions du clonage
Quelle est la capacité de réplication d'un plasmide?
Il est capable de se répliquer indépendamment du chromosome bactérien.
p.24
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Qu'est-ce qu'un site de clonage multiple?
Un site de clonage multiple contient de nombreux sites de restriction uniques permettant l'insertion de l'ADN après le promoteur.
p.18
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la séquence de l'amorce utilisée dans le produit PCR formé à partir du brin 1?
5'T A T C G T C G G A A T C C A T G C G T A C G 3'
p.6
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.11
Amplification de l'ADN par PCR
Quel est le sujet principal de ce document?
L'amplification du fragment d'ADN d'intérêt.
p.5
Vérification de la construction de l'ADN recombinant
Quelle est la dernière étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Vérification de la construction.
p.9
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quelle est la première étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt de l'organisme donneur.
p.7
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quel est le processus de synthèse des protéines chez les procaryotes?
Chez les procaryotes, l'ADN est transcrit en ARNm, qui est directement traduit en protéines.
p.15
Amplification de l'ADN par PCR
Pourquoi aucune molécule obtenue ne correspond au produit désiré à la fin du premier cycle de PCR?
Parce que le produit désiré n'est pas encore amplifié.
p.16
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle enzyme est couramment utilisée dans la PCR et d'où provient-elle?
La Taq polymérase, provenant de Thermophilus aquaticus.
p.31
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
De quelle bactérie provient l'enzyme EcoRI?
De la bactérie Escherichia coli.
p.37
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Que se passe-t-il au niveau des extrémités complémentaires lors de la ligation?
Hybridation au niveau des extrémités complémentaires.
p.28
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Que sont la plupart des sites de restriction ?
Des séquences palindromiques.
p.39
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la dernière étape de la technologie de l'ADN recombinant?
Amplification de l'ADN recombinant obtenu.
p.43
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la conséquence de la multiplication des bactéries transformées?
L'amplification du nombre de plasmides recombinés.
p.6
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quelle est la deuxième étape après l'extraction du fragment d'ADN d'intérêt?
Clonage du fragment d'intérêt dans le vecteur.
p.4
Définitions du clonage
Qu'est-ce que l'ADN recombinant?
ADN formé par le clonage d'un fragment d'intérêt dans un vecteur.
p.7
ADN recombinant et vecteurs
Quels sont les composants de l'ARN?
L'ARN est composé d'un simple brin avec les bases A, U, G, et C.
p.13
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la longueur typique des amorces utilisées dans l'amplification de l'ADN?
En général, les amorces ont une longueur de 15 à 25 nucléotides.
p.23
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quelle est la propriété principale du site de clonage multiple dans le plasmide pET-15b?
Il contient de nombreux sites de restriction uniques permettant l'insertion de l'ADN après le promoteur.
p.20
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Que signifie le terme 'ADN recombinant'?
ADN formé par le clonage du fragment d'intérêt dans le vecteur.
p.25
ADN recombinant et vecteurs
Quel gène de résistance est présent dans le plasmide pET-15b?
Gène de résistance à l'ampicilline.
p.26
ADN recombinant et vecteurs
Quelle est la fonction de la séquence promotrice dans le plasmide pET-15b?
Permettre la transcription du gène d’intérêt.
p.17
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la séquence des amorces utilisées dans le 2ème cycle de PCR?
Les amorces sont en magenta: 5' GTGCGGAATCCATGCGTACG 3'.
p.32
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quelle est la fonction des enzymes de restriction dans la digestion du fragment d'ADN et du vecteur?
Les enzymes de restriction coupent l'ADN à des sites spécifiques, créant des extrémités cohésives.
p.37
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quelle est la dernière étape pour lier les deux fragments d'ADN?
Lier ces deux fragments d'ADN de façon covalente.
p.34
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la fonction des amorces spéciales utilisées dans la PCR pour ajouter des sites de restriction?
Elles comportent une partie s'hybridant sur l'ADN à amplifier et une partie qui ne s'hybride pas comportant la séquence d'un site de restriction.
p.29
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Comment les enzymes de restriction limitent-elles les infections virales chez les bactéries?
En coupant l'ADN étranger.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Comment les bactéries chimio-compétentes sont-elles préparées?
Par fragilisation de la membrane par traitement chimique.
p.41
Transformation des bactéries et sélection
Quel est le rôle du gène de résistance dans le plasmide?
Permettre aux bactéries transformées de se multiplier en présence d'un antibiotique.
p.8
Définitions du clonage
Comment l'ADN complémentaire (ADNc) est-il obtenu?
Par transcription inverse sur des ARN messagers.
p.5
Définitions du clonage
Quelle est la première étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Origine de l'ADN de l'organisme donneur.
p.20
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la deuxième étape de la technologie de l'ADN recombinant?
Amplification du fragment d'ADN.
p.26
ADN recombinant et vecteurs
Quelle est l'origine de réplication dans la bactérie pour le plasmide pET-15b?
Origine de réplication dans la bactérie.
p.17
Propriété intellectuelle et conditions d'utilisation
Qu'est-ce que ce document stipule concernant sa diffusion et reproduction?
Ce document est la propriété d’Aix Marseille Université, il ne peut être diffusé ou reproduit.
p.21
Définitions du clonage
Sur quoi repose le clonage?
Sur l'insertion d'un fragment d'ADN exogène dans un vecteur.
p.31
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quelle est la fonction des enzymes de restriction dans la digestion du fragment d'ADN et du vecteur?
Les enzymes de restriction coupent l'ADN à des sites spécifiques.
p.37
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quelle est la première étape de la ligation du fragment d'ADN dans le vecteur?
Insertion du fragment d'ADN dans le vecteur ouvert purifié.
p.28
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Qu'est-ce qu'une endonucléase ?
Une enzyme qui coupe à l'intérieur du brin d'ADN au niveau des liaisons phosphodiesters.
p.29
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
De quel organisme dérive l'enzyme Bam HI?
Bacillus amyloliquefaciens.
p.39
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quelle est la première étape de la technologie de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt de l'organisme donneur.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Quelle est l'efficacité de transformation des bactéries chimio-compétentes?
10^6 - 10^8 cellules par µg d'ADN.
p.43
Transformation des bactéries et sélection
Pourquoi l'antibiotique est-il ajouté au milieu de culture des bactéries transformées?
Pour assurer une pression de sélection afin que les bactéries conservent le plasmide.
p.43
Extraction et purification du plasmide recombiné
Quelle étape suit la multiplication des bactéries pour obtenir des plasmides recombinés?
La purification du plasmide.
p.44
Vérification de la construction de l'ADN recombinant
Quelle est la différence entre une colonie de bactéries transformées avec le vecteur vide et une colonie transformée avec l'ADN recombinant ?
La colonie avec le vecteur vide ne contient pas l'insert cloné, tandis que la colonie avec l'ADN recombinant contient l'insert cloné.
p.6
ADN recombinant et vecteurs
Que signifie le terme 'ADN recombinant'?
ADN formé par le clonage du fragment d'intérêt dans le vecteur.
p.11
Propriété intellectuelle et conditions d'utilisation
Quelle est la propriété de ce document?
Ce document est la propriété d’Aix Marseille Université.
p.9
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la deuxième étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Amplification du fragment d'ADN.
p.15
Amplification de l'ADN par PCR
Que se passe-t-il après la fin du premier cycle de PCR?
Un nouveau cycle de PCR commence.
p.20
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quelle est la première étape de la technologie de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt de l'organisme donneur.
p.24
ADN recombinant et vecteurs
Quelle est l'origine de réplication dans la bactérie pour le plasmide pET-15b?
L'origine de réplication est indiquée sur le plasmide pET-15b.
p.17
Amplification de l'ADN par PCR
Quels sont les produits du 2ème cycle de PCR?
Produit PCR formé à partir du brin 1: 5' TATCGTGCGAATCCATGCGTACG 3', Produit PCR formé à partir du brin 2: 5' GTGCGGAATCCATGCGTACG 3', Produit PCR formé à partir du brin 3: 5' GTGCGGAATCCATGCGTACG 3', Produit PCR formé à partir du brin 4: 5' GTGCGGAATCCATGCGTACG 3'.
p.21
ADN recombinant et vecteurs
Quelle est une propriété essentielle d'un vecteur pour le clonage?
Capacité de réplication autonome dans une cellule hôte donnée.
p.31
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Où l'enzyme EcoRI coupe-t-elle l'ADN?
Entre les nucléotides G et A dans la séquence GAATTC.
p.35
Amplification de l'ADN par PCR
Que contient le produit de PCR?
L'ADN d'intérêt et les sites de restriction à ses extrémités.
p.28
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
D'où provient le nom des enzymes de restriction ?
Du genre et de l'espèce bactérienne à partir de laquelle elles ont été isolées.
p.29
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quelle est la fonction des enzymes de restriction?
Couper (détruire) l'ADN étranger, notamment des virus.
p.38
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quelle est la fonction de la ligase dans le processus de ligation de l'ADN?
La ligase est une enzyme capable de former des liaisons covalentes (liaisons phosphodiester) entre deux molécules d'ADN.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Quelle est la dernière étape de la transformation des bactéries?
Étalement sur boîte à sélection.
p.41
Transformation des bactéries et sélection
Que forme une colonie de bactéries transformées?
Des bactéries comportant le plasmide recombiné.
p.42
Amplification de l'ADN par PCR
Quel gène de résistance est présent dans le plasmide pET-15b?
Le gène de résistance à l'ampicilline.
p.45
Vérification de la construction de l'ADN recombinant
Comment vérifie-t-on la construction de l'ADN recombinant?
Par PCR et cartographie de restriction.
p.6
Génie génétique et techniques de l'ADN recombinant
Quelle est la première étape dans la technologie de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt de l'organisme donneur.
p.4
Obtention de l'ADN recombinant
Quelle est la première étape de l'obtention de l'ADN recombinant?
Extraction du fragment d'ADN d'intérêt de l'organisme donneur.
p.7
Définitions du clonage
Quelle est la principale différence dans la synthèse des protéines entre les eucaryotes et les procaryotes?
Chez les eucaryotes, l'ARNm subit une maturation avec l'élimination des introns (exons), tandis que chez les procaryotes, l'ARNm est directement traduit en protéines.
p.22
Définitions du clonage
Qu'est-ce qu'un plasmide?
Une petite molécule extra-chromosomique, d'ADN double brin circulaire, de 3 à 10 kilobases.
p.25
ADN recombinant et vecteurs
Quelle est l'origine de réplication dans la bactérie pour le plasmide pET-15b?
Origine de réplication dans la bactérie.
p.24
ADN recombinant et vecteurs
Quelle est une propriété clé du vecteur plasmidique pET-15b?
Le plasmide pET-15b possède un site de clonage multiple avec de nombreux sites de restriction uniques.
p.18
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle est la séquence de l'amorce utilisée dans le produit PCR formé à partir du brin 4?
5'G T C G G A A T C C A T G C G T A C G 3'
p.21
ADN recombinant et vecteurs
Quels sont les avantages supplémentaires que peut offrir un vecteur?
Système de régulation inductible, séquence protéique supplémentaire pour purification ou identification, origine de réplication autre, gène rapporteur.
p.30
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quel est le rôle de l'insertion de l'ADN dans le vecteur?
Permettre l'intégration du fragment d'ADN dans un vecteur pour des applications de génie génétique.
p.33
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Qu'est-ce que le plasmide pET-15b?
Un exemple de vecteur utilisé pour l'insertion de l'ADN.
p.35
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quel est le rôle des sites de restriction dans le clonage?
Ils permettent la digestion du fragment d'ADN d'intérêt pour l'insertion dans le vecteur.
p.36
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Pourquoi est-il important d'obtenir des extrémités cohésives complémentaires entre le fragment d'ADN et le vecteur?
Cela permet l'insertion du fragment d'ADN dans le vecteur.
p.38
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Qu'obtient-on après la ligation de l'ADN dans le vecteur?
On obtient un plasmide recombiné.
p.39
ADN recombinant et vecteurs
Qu'est-ce qu'un vecteur dans la technologie de l'ADN recombinant?
Un fragment d'ADN capable de réplication autonome.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Quelle est la première étape de la transformation des bactéries?
Mélange de plasmides et de bactéries compétentes sur glace.
p.41
Propriété intellectuelle et conditions d'utilisation
Quelle est la propriété d'Aix Marseille Université mentionnée dans le document?
Le document ne peut être diffusé ou reproduit.
p.13
Amplification de l'ADN par PCR
Qu'est-ce qu'une amorce dans le contexte de l'amplification de l'ADN?
Une séquence de nucléotides complémentaires de l'extrémité de la région à amplifier.
p.14
Amplification de l'ADN par PCR
Quels composants sont nécessaires dans le milieu réactionnel pour l'élongation?
ADN polymérase et nucléotides.
p.26
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Qu'est-ce qu'un site de clonage multiple dans le plasmide pET-15b?
Nombreux sites de restriction uniques permettant l'insertion de l'ADN après le promoteur.
p.17
Amplification de l'ADN par PCR
Quels sont les produits du 1er cycle de PCR?
Brin 1: 5' TATCGTGCGAATCCATGCGTACG 3', Brin 2: 3' ATAGCAGCCTTAGGTACGC 5', Brin 3: 5' GTGCGGAATCCATGCGTACG 3', Brin 4: 3' ATAGCAGCCTTAGGTACGC 5'.
p.31
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quelle séquence de nucléotides est reconnue par l'enzyme EcoRI?
GAATTC (5') et CTTAAG (3').
p.33
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Pourquoi le site de clonage multiple est-il important dans le plasmide pET-15b?
Parce qu'il contient de nombreux sites de restriction uniques permettant l'insertion de l'ADN.
p.34
Amplification de l'ADN par PCR
Comment peut-on ajouter les sites de restriction aux extrémités de l'ADN à cloner?
Par PCR avec des amorces spéciales.
p.39
Définitions du clonage
Qu'est-ce que l'ADN recombinant?
ADN obtenu après le clonage du fragment d'intérêt dans le vecteur.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Que se passe-t-il lors du choc thermique à 42°C?
Les plasmides vont pénétrer dans les bactéries.
p.41
Transformation des bactéries et sélection
Que contient le mélange de bactéries transformées?
Le plasmide d'intérêt et des bactéries non transformées.
p.45
Amplification de l'ADN par PCR
Quelle technique est utilisée pour amplifier l'ADN avec les amorces ayant servi à l'obtention de l'insert?
La PCR (Polymerase Chain Reaction).
p.30
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quelle est la fonction des enzymes de restriction dans la digestion du fragment d'ADN et du vecteur?
Les enzymes de restriction coupent l'ADN à des sites spécifiques.
p.32
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quel est l'exemple d'enzyme de restriction mentionné dans le document?
L'enzyme EcoRI provenant de la bactérie Escherichia coli.
p.36
Propriété intellectuelle et conditions d'utilisation
Quelle est la propriété d'Aix Marseille Université mentionnée dans le document?
Le document ne peut être diffusé ou reproduit.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Pourquoi ajoute-t-on un milieu nutritif aux bactéries après le choc thermique?
Pour permettre la croissance des bactéries et l'expression des protéines de résistance aux antibiotiques.
p.41
Transformation des bactéries et sélection
Pourquoi seules les bactéries transformées peuvent se multiplier sur une boîte contenant un milieu gélosé et un antibiotique?
Parce que le plasmide porte un gène de résistance contre l'antibiotique.
p.45
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Qu'est-ce que la cartographie de restriction?
La digestion enzymatique par des enzymes de restriction et l'analyse des produits obtenus sur gel d'agarose.
p.30
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quelle est la séquence de reconnaissance de l'enzyme EcoRI?
GAATTC (5') et CTTAAG (3').
p.32
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Qu'est-ce qu'une extrémité cohésive?
Une extrémité cohésive est une extrémité d'ADN qui peut facilement s'apparier avec une autre extrémité complémentaire.
p.28
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Qu'est-ce qu'une enzyme de restriction ?
Une protéine capable de couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides caractéristique appelée site de restriction.
p.36
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Que se passe-t-il si l'on digère le fragment d'ADN d'intérêt et le vecteur par les deux mêmes enzymes?
On obtient des extrémités cohésives complémentaires entre ces deux molécules d'ADN.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Comment les bactéries électro-compétentes sont-elles préparées?
Par électroporation, un choc électrique qui fragilise la membrane et permet l'entrée de l'ADN par les pores.
p.45
Transformation des bactéries et sélection
Qu'est-ce qu'une colonie de bactéries transformées avec le vecteur vide?
Une colonie de bactéries qui n'a pas intégré l'ADN recombinant.
p.32
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quel est le site de restriction de l'enzyme EcoRI?
GAATTC (5') et CTTAAG (3').
p.28
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Que signifie 'Eco RI' ?
Escherichia (genre), coli (espèce), Ry13 (souche), 1ère enzyme de restriction extraite de E. coli.
p.44
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Qu'est-ce qu'un vecteur vide ?
Un vecteur qui s'est ligué sur lui-même sans intégrer l'insert cloné.
p.36
Enzymes de restriction et digestion de l'ADN
Quel est le rôle des enzymes de restriction dans la digestion du fragment d'ADN et du vecteur?
Elles coupent l'ADN pour créer des extrémités cohésives complémentaires.
p.38
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quel type de liaison est formé par la ligase entre deux molécules d'ADN?
La ligase forme des liaisons phosphodiester.
p.40
Transformation des bactéries et sélection
Quelle est l'efficacité de transformation des bactéries électro-compétentes?
10^10 cellules par µg d'ADN.
p.43
Transformation des bactéries et sélection
Quel est le but de l'ensemencement d'une colonie de bactéries transformées dans un milieu liquide avec antibiotique?
Assurer une pression de sélection pour que les bactéries conservent le plasmide.
p.44
Vérification de la construction de l'ADN recombinant
Pourquoi est-il nécessaire de cribler les clones ?
Pour trouver les clones positifs ayant intégré l’ADN à cloner.
p.38
Ligation et insertion de l'ADN dans le vecteur
Quel est l'intérêt d'utiliser deux enzymes différentes lors de la digestion de l'ADN?
L'utilisation de deux enzymes différentes permet l'insertion orientée de l'ADN à cloner dans le vecteur et limite la ligation du vecteur sur lui-même.
p.44
Transformation des bactéries et sélection
Que possèdent les bactéries poussant sur le milieu avec antibiotique ?
Un plasmide avec le gène de résistance à l’antibiotique.
p.45
Transformation des bactéries et sélection
Qu'est-ce qu'une colonie de bactéries transformées avec l'ADN recombinant?
Une colonie de bactéries qui a intégré l'ADN recombinant.
